Virus de la granulosis de Epinotia aporema (barrenador de los brotes de soja): identificación y estudio biológico-molecular de un gen homólogo a la ecdisona glucosil transferasa (egt)

La capacidad de los baculovirus de producir epizootias y regular el tamaño de las poblaciones de insectos ha sido aprovechada para la sustitución de insecticidas tóxicos de amplio espectro en programas de manejo integrado de plagas. En tal sentido, numerosos baculovirus han sido desarrollados como bioinsecticidas y registrados para su comercialización. Sin embargo, salvo ciertas excepciones, el uso de baculovirus como alternativa de control de plagas se ha enfrentado con una serie de inconvenientes. En primer lugar, en la mayoría de los países, su costo de producción es elevado en comparación con el de los insecticidas químicos. En segundo lugar, la velocidad de acción de los insecticidas virales es baja (4-8 días). Por último, la producción del virus sobre larvas del hospedador requiere de un estricto control de calidad tanto de la cría de insectos como del inoculo, factor que a menudo no ha sido tenido en cuenta. Parte de estas desventajas podrían solucionarse utilizando estrategias de modificación genética del genoma viral. Es con esta premisa que en el laboratorio se abordó la caracterización bioquímica y molecular de un aislamiento viral (EpapGV) obtenido en Oliveros (Santa Fe) con alta virulencia para el insecto plaga de la soja Epinotia aporema o “barrenador de los brotes”. Se construyó una genoteca del DNA viral de EpapGV que sentó las bases para los estudios posteriores relativos al análisis del papel que juegan los diferentes factores virales en la patogenicidad en E. aporema. Específicamente se ha estudiado al gen egt y a su producto ecdisona glicosil transferasa (EGT). La elección de este gen se basó fundamentalmente en dos aspectos: la observación de un retraso en la muda de la larva de E. aporema infectada con EpapGV y la similitud de estas observaciones con otras informadas para infecciones virales producidas por NPVs, las cuales han sido asociadas a la presencia del gen egt. Los resultados obtenidos a partir de estos estudios permitieron determinar que el gen egt de EpapGV se encuentra bajo la acción de un promotor temprano y que su producto de expresión efectivamente modifica a la hormona ecdisona. Asimismo, se inició el estudio del gen de helicasa relacionado con la especificidad de rango de huéspedes. Se encontraron dos genes, helicasa I y II. Se pudo detectar que Helicasa I posee motivos asociados a su función de desenrrollamiento sobre el DNA mientras que Helicasa II posee motivos AAA-ATPasa, encontrados en la super familia 1 de las RNA helicasas virales, asociados al mantenimiento de múltiples funciones celulares. Finalmente se desarrolló un método de control de calidad de los stocks virales que formarán parte de la formulación del bioinsecticida. Se desarrolló un método de multiplex PCR que permite identificar a EpapGV en formulados bioinsectidas de manera específica y sensible. Los patrones obtenidos para este virus pueden diferenciarse de los obtenidos para un granulovirus (CpGV) y un poliedrovirus (AgMNPV). Los resultados alcanzados sobre caracterización de EpapGV contribuyeron al conocimiento de la interacción insecto-patógeno y aportaron información básica de importancia en el futuro diseño de estrategias de mejoramiento genético del virus. Además, el desarrollo de las técnicas moleculares aplicadas en el control de calidad complementa los requisitos imprescindibles para el registro del virus como insecticida biológico. Tesis digitalizada en SEDICI gracias a la Biblioteca Central de la Facultad de Ciencias Exactas (UNLP). Doctor en Ciencias Exactas, área Ciencias Biológicas