Determinación de la actividad de la papaína en formas farmacéuticas tópicas: de la metodología analítica

La papaína es una enzima proteolítica usada en formulaciones tópicas para el tratamiento de quemaduras, heridas, cicatrices, exfoliación de la piel mediante depilado, así como agente depilatorio progresivo y para incrementar la absorción cutánea. El presente trabajo tiene como finalidad validar una metodología que cuantifique la actividad de la papaína en formas farmacéuticas semisólidas. Para la validación del método fueron considerados los siguientes parámetros: linealidad, especificidad, límite de detección, cuantificación, precisión y exactitud. Benziloxicarbonil-fenilialanina-arginina 7-amido 4-metilcumarina fue usada como sustrato para el análisis de la actividad enzimática de la papaína, la cual fue determinada por detección espectrofluorormétrica de la 7- amido-4-metilcumarina adherida a microplacas. El método fue validado de acuerdo con los siguientes resultados experimentales: coeficiente de correlación (r = 0,9974); Límite de detección (LOD = 0,040 USP.mL–1 ), límite de cuantificación (LOQ = 0,12 USP.mL–1 ), precisión (RSD % = 2,7 a 5,0), y exactitud (E% = 95,3 a 96,7), demostrando además especificidad para el ensayo realizado en las formulaciones tópicas, siendo este un método simple, rápido y con una adecuada sensibilidad. Papain is a proteolytic enzyme used in topical formulations for peeling and treatment of burns, wounds and scars. It is also used as progressive depilatory agent and as cutaneous absorption enhancer. This work was aimed at validating a spectrofluorimetic method to quantify the activity of papain in semisolid pharmaceutical dosage forms. Benzyloxycarbonyl-phenylalanyl-arginine 7-amido-4-methylcoumarin was used as substrate in assays performed in microplates. The production of 7-amido-4-methylcoumarin (7-MCA) over different periods of time was used to quantify the concentration of papain in pharmaceutical forms. This method presented a linear relationship between papain concentration and rate of 7-MCA production (R = 0.9974). Besides that, the method presented an estimated detection limit (LOD) of 0.040 USP.mL–1 , an estimated quantification limit (LOQ) of 0.12 USP.mL–1 , a precision (RSD%) ranging from 2.7 to 5.0 and an accuracy (E%) of 95.3 to 96.7. Components of the tested topical formulation did not interfere in the papain detection. Finally, the method is simple and fast. Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aires