Estabilización funcional de la tripsina de páncreas bovino por modificación enzimática y química con derivados polisacáridos

La estabilidad funcional de las enzimas es un factor determinante en el empleo de estos biocatalizadores en numerosas áreas del desarrollo socio-económico humano. Por tal motivo, el establecimiento de nuevos métodos orientados a incrementar la estabilidad de estas biomoléculas constituye un tópico de gran relevancia dentro de la tecnología enzimática y la química de proteínas. En el presente trabajo se describen diferentes métodos de estabilización enzimática, utilizando como enzima patrón la tripsina de páncreas bovino. Los métodos empleados fueron los siguientes: Glicosidación enzimática con derivados aminados de carboximetilcelulosa, dextrana y ficoll, empleando la enzima transglutaminasa como catalizador. La conjugación química covalente de la proteasa con derivados poliméricos de la ?ciclodextrina. La efectividad de estos procedimientos se evidenció por la alta estabilización funcional conferida a la enzima en estudio, especialmente frente a los procesos de inactivación térmica. Frente a los procesos de degradación autolítica, el conjugado tripsina-dextrana mostró un incremento del t 1/2 de 32 veces con respecto a la enzima nativa (ambos conjugados obtenidos por vía enzimática). El conjugado de tripsina-CMC-CD mostró un incremento del t 1/2 de 83.3 veces con respecto a la enzima nativa (conjugado obtenido por vía química) cuando fue sometido a la acción desactivante del surfactante aniónico, dodecilsulfato de sodio. Los conjugados obtenidos, por ambas vías, mostraron igualmente un incremento de su estabilidad en presencia de SDS en comparación con la tripsina. De igual forma, en el presente trabajo se comprueba la influencia directa de la formación de interacciones supramoleculares del tipo ?-ciclodextrinas-proteínas sobre la estabilidad mostrada por los biocatalizadores preparados por vía química. Los espectros de emisión obtenidos en presencia de 1-adamantanol, así como la disminución de los t 1/2 del proceso de inactivación térmica de los conjugados en presencia de este compuesto demuestran la estabilización funcional obtenida para la tripsina, mediante la formación de interacciones supramoleculares. Los resultados mostrados en este trabajo establecen una nueva metodología enzimática para la obtención de neoglicoconjugados estables, así como la estabilización por la ocurrencia de asociaciones supramoleculares del tipo ?ciclodextrina-proteína y su influencia sobre la termoestabilización de la tripsina.